Ayamonte es fácilmente accesible en coche desde Sevilla (aproximadamente 140 km por la A-49) y Huelva (unos 45 minutos por la N-431). El aeropuerto más cercano es el de Faro, Portugal, a unos 70 km, al que se accede por la Vía Infante de Sagres (IP1). Además, Ayamonte está conectada con Vila Real de Santo António, en Portugal, a través del Puente Internacional del Guadiana, facilitando el acceso desde el país vecino.